periférica de humanos (Hum-PLMN).
Se probaron dos agentes químicos N-metil-nitrosourea (MNU) y dibromuro de etileno (EDB) y sus mezclas en una proporción de 50:50. Se utilizaron por lo menos 3 concentraciones de cada uno de los químicos (para MNU en un rango de 10 a 100 ppm, para EDB en Trad-MCN en un rango de 10 a 300 ppm; y en Mus PEMN y HUM-PLMN en un rango de 150 a 700 ppm; para las mezclas se utilizaron combinaciones de las mismas concentraciones), junto con su control negativo y los experimentos se hicieron al menos por duplicado. Las concentraciones probadas se seleccionaron en base a estudios previos y a lo reportado en la literatura. El MNU fue disuelto en agua destilada y el EDB en etanol.

Detección de micronúcleos en tétradas de tradescantia (MCN-TRAD):

Se utilizó la clona 4430 de Tradescantia, que es un híbrido entre T. hirsutiflora y T. subcalis. Las plantas se cultivaron en un invernadero y se utilizaron por lo menos 15 inflorescencias por grupo experimental, a fin de tener suficiente material para preparar al menos 5 laminillas en la etapa adecuada de tétradas. Dichas inflorescencias, cuyo tallo debe medir de 10 a 25 cm de largo, se mantuvieron durante el tratamiento en vasos de plásticos o de vidrio que contenían la concentración adecuada del químico a probar y en solución de Hoagland para el periodo de recuperación. Los cortes fueron suspendidos en papel aluminio, mismo que servía como cubierta para el vaso. La duración del tratamiento fue de 6 horas seguida por un periodo de recuperación de 24 horas. Una ventaja que tiene el uso de estas plantas es que el tiempo de la división meiótica se conoce (Taylor, 1950) y para llegar de la primera profase a la etapa de tétradas tarda aproximadamente 30 hrs. Para seleccionar el tiempo de tratamiento se probaron diferentes tiempos entre 1 y 30 hrs., resultando el más adecuado el de 6 hrs. Tras el periodo de recuperación las inflorescencias se fijaron en una solución fresca de etanol:ácido acético 3:1. Tras 24 horas de fijación, los botones se pasaron a etanol al 70% para su conservación.
Las laminillas se prepararon utilizando el método de aplastamiento, es decir, se disectaron los botones, se añadió el colorante de acetocarmina y se aplastaron las anteras con las agujas de disección; posteriormente se eliminaron los desechos y se puso un cubreobjetos. Los micronúcleos se contaron en un microscopio óptico con un aumento de 400X. Generalmente se cuentan 300 tétradas en cada una de 5 laminillas, es decir 1500 células por cada grupo experimental.
La media y la desviación estándar se obtuvieron de cada grupo experimental. Para valorar la significancia de la frecuencia de micronúcleos inducidos se usaron las pruebas F y de Dunnet con un nivel de confianza de 95 %.

Detección de micronúcleos en eritrocitos de sangre periférica de ratón (MUS-PEMN):

Se utilizaron ratones de la cepa CD-1, de 12 semanas de edad y 30 gramos de peso promedio (25 a 35 gramos), los cuales fueron obtenidos de la Universidad Nacional Autónoma de México. Se utilizaron 4 ratones para cada grupo de tratamiento que se alimentaron con dieta comercial y agua de la llave. La asignación de los ratones a los grupos de tratamientos fue al azar.
Fue un tratamiento agudo con concentraciones de MNU y EDB suficientes para que en el tiempo de tratamiento (54 y 78 hrs.) pudieran inducir genotoxicidad, pero sin causar efectos subletales o letales. Las sustancias de prueba se aplicaron vía intraperitoneal

Continua...