utilizando 0.1 ml. de solución stock por cada 10 gramos de peso corporal. Las muestras de sangre (10ml) se colectaron con una pequeña punción en la cola del ratón y se mezclaron con EDTA (2%) en una proporción de 2:1, las laminillas se prepararon por el método de corrimiento, utilizando una gota pequeña. Después de 24 horas estas fueron fijadas en metanol absoluto durante 5 minutos y luego teñidas con Giemsa 5% (pH 6.8) por 90 minutos y con Hematoxilina de Harris por 2 minutos. Se dejaron secar al aire por 24 horas y se hicieron permanentes con euparal. Se prepararon 2 laminillas por animal y se contaron 2000 eritrocitos por laminilla, a fin de detectar la frecuencia de micronúcleos.
Se calcularon la media de la muestra y las desviaciones estándar por cada grupo experimental. Para valorar la significancia de la frecuencia de micronúcleos inducidos se usaron las pruebas F y de Dunnet con un nivel de confianza de 95 %.

Detección de micronúcleos en linfocitos de sangre periférica humana (HUM-PLMN):

Se colectó sangre fresca de un voluntario masculino sano y no fumador (un estudiante de profesional de 20 años de edad). La sangre fue colocada en tubos de plásticos con heparina (100 unidades). La sangre completa (0.3, ml) fue cultivada en 4.7 ml. de medio de McCoy que contenía 20% de suero fetal de ternera, dentro de tubos de cultivo de 15 ml. a 36º C, en atmósfera humidificada. Se realizaron cultivos por duplicado.
Se añadieron 3 mg/mL de fitohemaglutinina a cada cultivo para estimular división celular. Los químicos de prueba se añadieron al cultivo después de 44 horas de incubación. Los cultivos se cosecharon a las 72 horas de su iniciación, añadiéndose 8 mL de una solución de cianuro de potasio (3.3
mg/mL) durante 4 minutos, para lisar los glóbulos rojos, los cuales después fueron centrifugados por 10 min. a 1000 rpm.
El pellet fue disuelto en 0.2 mL de medio de McCoy y las laminillas se prepararon por el método de goteo. Las laminillas se secaron al aire por 24 horas y se tiñeron con May-Gruenwald y Giemsa. (Solución May-Gruenwald sin diluir por 3 minutos; May-Gruenwald: Agua destilada 1:1 por 2 minutos y Giemsa: Agua destilada 1:6 por 10 minutos).
Se contaron 2000 linfocitos mononucleados por cada cultivo por duplicado. Las laminillas se contaron a 1000X de aumento. La media y la desviación estándar se obtuvieron de cada grupo experimental. Para valorar la significancia de la frecuencia de micronúcleos inducidos se usaron las pruebas F y de Dunnet con un nivel de confianza de 95 %.

Resultados y discusión.

Los resultados se muestran en las Tablas 1 a 3 y en las Figuras 1 y 2. En las tablas se muestra el promedio de las frecuencias relativas de micronúcleos, es decir, las frecuencias inducidas por los mutágenos, divididas entre las frecuencias inducidas por el control negativo. En las figuras se presentan las frecuencias absolutas de micronúcleos. Se puede observar que en el caso de MNU (Tabla 1 y Figura 1) se obtuvieron resultados significativamente diferentes del control en los tres sistemas de prueba que se usaron. En la determinación de MCN en tétradas de Tradescantia en todas las concentraciones probadas se obtuvieron resultados significativos, aunque el incremento sobre el control no fue muy grande (2.42-2.74); en ratones nuevamente los resultados fueron significativamente diferentes, pero con un incremento mayor sobre el control (2.46-9.24) y en humanos solo las dos últimas concentraciones fueron significativamente diferentes con un

Continua...